1. PCR 体系:推荐体系(50 μl)试剂用量模板 DNA10 × Taq PCR Buffer5 μldNTP Mixture(2.5 mM each)4 μlPrimer 1 (10 μM)2 μlPrimer 2 (10 μM)2 μlTaq DNA Polymerase (2.5 U/μl)0.5 ~ 1 μlddH2OUp to 50 μl(注意:a 引物浓度请以终浓度 0.1-1.0μM 作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下,可提 高引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。b 镁离子浓度请以 终浓度 1.5-3mM 作为设定范围的参考。可根据不同的引物对和模板来调节镁离子浓度,由此优化反应体系)2. PCR 程序过程温度时间预变性94℃5 min变性94℃30 sec25~35cycles 退火55-65℃30 sec延伸72℃1kb/30 sec终延伸72℃5 min(注意:a 一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度 Tm 低 5℃,无法得到理想的扩增效率时, 适当降低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。b 延伸时间应根 据所扩增片段大小设定,Taq DNA Polymerase 的扩增效率为 1 kb/30 sec。c 可根据扩增产物的下 游应用设定循环数。如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,错配机率会增加,非 特异性背景严重。所以,在保证产物得率的前提下,应尽量减少循环次数)3. 结果检测:反应结束后取 5 μl 反应产物,加入适量上样缓冲液后进行琼脂糖凝胶电泳 检测。
本产品供科学研究和生产使用,用于组织和细胞的体外培养。禁止临床使用。
1. PCR 体系: 推荐体系(50 ul)试剂用量模板 DNA10 × Taq PCR Buffer5 μldNTP Mixture(2.5 mM each)4 μlPrimer 1 (10 μM)2 μlPrimer 2 (10 μM)2 μlHotstart Taq DNA Polymerase (2.5 U/μl)0.5 ~ 1 μlddH2OUp to 50 μl(注意:a 引物浓度请以终浓度 0.1-1.0μM 作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下,可提 高引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。b 镁离子浓度请以 终浓度 1.5-3mM 作为设定范围的参考。可根据不同的引物对和模板来调节镁离子浓度,由此优化反应体系)2. PCR 程序过程温度时间预变性94℃5 min变性94℃30 sec25~35cycles 退火55-65℃30 sec延伸72℃1kb/30 sec终延伸72℃5 min(注意:a 一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度 Tm 低 5℃,无法得到理想的扩增效率时,适当降低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。b 延伸时间应根据所扩增片段大小设定,Hotstart Taq DNA Polymerase 的扩增效率为 1 kb/30 sec。c 可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,错配机率会增加,非特异性背景严重。所以,在保证产物得率的前提下,应尽量减少循环次数)3. 结果检测:反应结束后取 5 μl 反应产物,加入适量上样缓冲液后进行琼脂糖凝胶电泳检测。
本产品供科学研究和生产使用,用于组织和细胞的体外培养。
a .一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度 Tm 低 5℃,无法得到理想的扩增效率时,适 当降低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。b .延伸时间应根据所扩 增片段大小设定,Taq DNA Polymerase 的扩增效率为 1 kb/30 sec。c .可根据扩增产物的下游应用设定 循环数。如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,错配机率会增加,非特异性背景严重。 所以,在保证产物得率的前提 下,应尽量减少循环次数
本产品供科学研究和生产使用,用于组织和细胞的体外培养。禁止临床使用。