1. 本试剂仅用于体外诊断,不作其他用途。 2. 开始实验前,应仔细阅读此说明书。 3. 本试剂仅限有专业经验或经专业培训的人员使用。 4. 避免试剂接触眼睛和粘膜,如接触到敏感区域,立即用大量清水冲洗。
(注意:以下举例为常规PCR反应体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的 片段大小不同进行相应的调整和优化) 1. PCR 体系: 推荐体系(50 μl)试剂用量模板 DNA10 × Taq Plus Buffer5 μldNTP Mixture(2.5 mM each)4 μlPrimer 1 (10 μM)2 μlPrimer 2 (10 μM)2 μlHotstart Taq Plus DNA Polymerase (2.5 U/μl)0.5 ~ 1 μlddH2OUp to 50 μl(注意:a 引物浓度请以终浓度 0.1-1.0μM 作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下,可提高引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。b 镁离子浓度请以 终浓度 1.5-3mM 作为设定范围的参考。可根据不同的引物对和模板来调节镁离子浓度,由此优 化反应体系)2. PCR 程序过程温度时间预变性94℃5 min变性94℃30 sec25~35cycles 退火55-65℃30 sec延伸72℃1kb/30 sec终延伸72℃5 min(注意:a 一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度 Tm 低 5℃,无法得到理想的扩增效率时, 适当降低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。b 延伸时间应根 据所扩增片段大小设定,Hotstart Taq Plus DNA Polymerase 的扩增效率为 1 kb/20-30 sec。c 可 根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,错 配机率会增加,非特异性背景严重。所以,在保证产物得率的前提下,应尽量减少循环次数)3. 结果检测:反应结束后取 5 μl 反应产物,加入适量上样缓冲液后进行琼脂糖凝胶...
1、 如 Buffer GL,Buffer W1 产生沉淀,可在 56℃水浴溶解; 2、 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的 DNA 片段小,提取量下降; 3、所有离心步骤均为台式离心机,室温下操作; 4、 按要求在 Buffer W1 和 Buffer W2 中加入无水乙醇。
1、常用浓度的 EDTA、Triton X-100、Tween 20、Sarkosyl、盐酸胍对蛋白酶 K 的活 力影响不大。 2、如果需要把 20mg/ml 的蛋白酶 K 稀释成一定浓度,可使用 10mM Tris-HCl pH7.4- 7.8 进行稀释。
1、如 Buffer GL,Buffer W1 产生沉淀,可在 56℃水浴溶解; 2、 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的 DNA 片段小,提取量下降; 3、 所有离心步骤均为台式离心机,室温下操作;
1、如 Buffer GTL 和 Buffer GL 产生沉淀,可在 56℃水浴溶解;2、样品应避免反复冻融,否则会导致提取的 DNA 片段小,提取量下降; 3、 所有离心步骤均为台式离心机,室温下操作; 4、按要求在 Buffer W1 和 Buffer W2 中加入无水乙醇。