不含染料的 MasterMix 产品在 PCR 结束后需混合适量的上样缓冲液再上样电泳, 含染料的 MasterMix 产品在 PCR 结束后可以直接上样电泳。
应用领域:适用于基因组学、蛋白质组学、细胞组学、 免疫检测、代谢组学、生物制药研究与开发以及其他常用的高通量移液过程。
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。 2. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
1. 本试剂仅用于体外诊断,不作其他用途。 2.开始实验前,应仔细阅读此说明书。 3. 本试剂仅限有专业经验或经专业培训的人员使用。 4. 避免试剂接触眼睛和粘膜,如接触到敏感区域,立即用大量清水冲洗。
1. 如 Buffer GTL 和 Buffer GL 产生沉淀,可在 56℃水浴溶解; 2. 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的 DNA 片段小,提取量下降; 3. 所有离心步骤均为台式离心机,室温下操作; 4. 按要求在 Buffer W1/W2 中加入无水乙醇。
(注意:以下举例为常规PCR体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小 不同进行相应的调整和优化) 1. PCR体系 推荐反应体系(20 μl)试剂用量模板 DNAPrimer 1 (10 μM)0.5 μlPrimer 2 (10 μM)0.5 μl2×Pfu PCR MasterMix10 μlddH2OUp to 20 μl(注意:引物浓度请以终浓度 0.1 - 1.0 μM 作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下,可提高引 物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系) 2. PCR 程序过程温度时间预变性94℃2 min变性94℃30 sec25 ~ 35cycles 退火55 ~ 65℃30 sec延伸72℃60 sec/kb最后延伸72℃5 min(注意:a 一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度 Tm 低 5℃,无法得到理想的扩增效率 时,适当降低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。b 延伸时间应 根据所扩增片段大小设定,Pfu DNA Polymerase 的扩增效率为1 kb/min。c 可根据扩增产物的下游 应用设定循环数。如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,错配机率会增加,非特异 性背景严重。所以,在保证产物得率的前提下,应尽量减少循环次数) 3. 结果检测:反应结束后取5 μl反应产物,加入适量上样缓冲液(含染料的不用加), 然后进行琼脂糖凝胶电泳检测。