(注意:以下举例为常规PCR 反应体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的 片段大小不同进行相应的调整和优化) 1. PCR 体系:推荐体系(50 ul)试剂用量模板 DNA10×快速高保真 Buffer5 μldNTP Mixture(2.5 mM each)4 μlPrimer 1 (10 μM)2 μlPrimer 2 (10 μM)2 μl快速高保真 DNA 聚合酶(野生型)0.5 ~ 1 μlddH2OUp to 50 μl2. PCR 程序过程温度时间预变性94℃5 min变性94℃30 sec25~35cycles 退火55-65℃30 sec延伸72℃1kb/15 sec终延伸72℃5 min(注意:a 一般实验中退火温度与扩增引物的熔解温度 Tm 相当,无法得到理想的扩增效率时, 适当降低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。) 3. 结果检测:反应结束后取 5 μl 反应产物,加入适量上样缓冲液后进行琼脂糖凝胶电泳 检测。
应用领域:基因组学,蛋白质组学,细胞组学,免疫检测,代谢组学,生物制药研究与开发以及其他常用的高通量移液过程.
1、细菌培养时间一般为 12 - 16 小时,如接种量大则应减少培养时间,过度培养会降低质 粒质量甚至导致质粒 DNA 突变; 2、 每次使用时都要注意 Buffer S2 和 S4 是否形成沉淀,如有沉淀 37℃溶解后再用; 3、质粒的产量跟细菌量、质粒拷贝数、质粒大小和操作规范程度密切相关。
本产品供科学研究和生产使用,用于组织和细胞的体外培养。禁止临床使用。
Thermo Scientific™ Nunc™ 多孔细胞培养板经 Thermo Scientific™ Nunclon™ Delta 表面处理,各类型细胞的最大粘附力得到提升并增高孔边缘,可减少污染风险。特点:平底和可堆叠提高孔边缘以降低交叉污染的风险γ 射线辐照灭菌,经认证无热原极佳的可视性孔带字母数字识别码圆孔样式:带通风盖,供气体交换孔周围凹陷区域为低挥发槽,可减少孔内液体蒸发盖有缺角,方便定位方孔样式:培养面积大可使用标准玻璃盖玻片: 4 孔板用 24 × 60mm;8 孔板用 22 × 22mm