（注意：以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的 片段大小不同进行相应的调整和优化） 1. PCR 体系： 推荐体系（50 μl）试剂用量模板 DNA10 × Pfu Buffer5 μldNTP Mixture(2.5 mM each)4 μlPrimer 1 (10 μM)2 μlPrimer 2 (10 μM)2 μlPfu DNA Polymerase (2.5 U/μl)0.5 ~ 1 μlddH2OUp to 50 μl（注意：a 引物浓度请以终浓度 0.1-1.0μM 作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提 高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。b 镁离子浓度请以 终浓度 1.5-3mM 作为设定范围的参考。可根据不同的引物对和模板来调节镁离子浓度，由此优 化反应体系）2. PCR 程序过程温度时间预变性94℃5 min变性94℃30 sec25~35cycles 退火55-65℃30 sec延伸72℃1kb/60 sec终延伸72℃5 min（注意：a.一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度 Tm 低 5℃，无法得到理想的扩增效率时， 适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。b.延伸时间应根 据所扩增片段大小设定，Taq DNA Polymerase 的扩增效率为 1 kb/60 sec。c.可根据扩增产物的下 游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非 特异性背景严重。所以，在保证产物得率的前提下，应尽量减少循环次数） 3. 结果检测：反应结束后取 5 μl 反应产物，加入适量上样缓冲液后进行琼脂糖凝胶电泳 检测。
反复冻融易导致抗生素失效，如果每次的使用量很小，可以适当分装后再使用。
应用领域：基因组学,蛋白质组学,细胞组学,免疫检测,代谢组学,生物制药研究与开发以及其他常用的高通量移液过程.
1、 细菌培养时间一般为 12-16 小时，如接种量大则应减少培养时间，过度培养会降低质 粒质量甚至导致质粒 DNA 突变； 2、每次使用时都要注意 Buffer S2 和 S4 是否形成沉淀，如有沉淀 37℃溶解后再用； 3、 注意溶液 S1，S2 和 S4 的用量比例，若细菌量增大，需按比例放大这些溶液的使用 量； 4、 质粒的产量跟细菌量、质粒拷贝数、质粒大小和操作规范程度密切相关。
本产品供科学研究和生产使用，用于组织和细胞的体外培养。禁止临床使用。
关联产品产品编号产品名称GZ020701-12 × Probe qPCR MixGZ020801-12×SYBR qPCR Mix