1. 本产品是 30×浓缩型保存液,1mL 游离 DNA 保存液可保存 30mL 新鲜血液。根据所处理的血液量加入所需要游离 DNA 保存液的体积。2. 将收集管存放于温度适当的地方,保存温度不要低于 4℃。3. 后续处理按常规的游离 DNA 提取即可。
1. 将约 1mL 游离 DNA 保存液加入到 10 mL 含游离 DNA 的血液样本中。2. 将收集管存放于 4℃-25℃条件下保存。3. 后续处理按常规的游离 DNA 提取操作即可。
1. 没有RNA产物。 最常见原因是模板有RNase污染,可用纯化好的RNA跟模板DNA一起保温再电泳, 再检测其是否有污染。 2. RNA产量低。 最常见的原因是DNA模板。在转录序列的第一个和第二个碱基最好都是G,在前14 个碱基内避免有U存在。 3. RNA长度比预期的短。 可能是模板序列中有T7 RNA聚合酶的终止序列。 4. RNA长度比预计的长。 T7 RNA聚合酶跟Taq DNA聚合酶一样,有不依赖于模板的加尾功能,最多有一半 的RNA可以带一个或两个碱基的尾巴。如果RNA长度比预计的长很多,使用的模板 又是 质粒DNA,则可能是质粒线性化不彻底。5. 5′单磷酸还是三磷酸? 如果使用GTP,则得到的RNA是三磷酸,体外转录时如果保温时间太长(如12小 时),则有50%的三磷酸会变成单磷酸。如果在转录体系中加入GMP,则T7 RNA聚 合 酶将优先使用GMP,所得RNA产物中5'端是单磷酸的比例将大大增加。 6. 用体外转录试剂盒如何得到带帽RNA? 需加入带帽NTP类似物即可。
本产品供科学研究和生产使用,用于组织和细胞的体外培养。禁止临床使用。
注意:尽管本产品含有病毒灭活剂,但不能排除离心管外在取样时污染了病毒,因 此操作人员必须按处理传染性样品的方法进行相应的防护,必须在合乎国家规定的实验 室进行所有操作。本产品具有抑菌性,但不能排除分装到采样管中时不被污染,分装前 后建议进行适当的灭菌处理。1. 将痰液病毒保存液分装到采样管中。 2. 采样前,在含有痰液病毒保存液的采样管的标签上标注相关样品信息。 3. 迅速将粘性生物样本放入含有痰液病毒保存液的采样管中,旋紧管盖,震荡采样 管直至液体变清亮。 4. 新鲜采集的标本应在 4℃-25℃下 96 小时(4 天)内运送至实验室,未能 96 小时 送至实验室的,应置于-70℃或以下保存,DNA 样品也可以放-20℃保存。
(注意:以下举例为推荐PCR体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的调整和优化)1. PCR体系推荐反应体系(20 μl)1. 试剂用量模板DNAPrimer mix (10 μM each)0.5 μl5 × Multiplex Buffer(无MgCl2)4 μlMultiplex DNA Polymerase1 μlMgCl2(25mM)1 μldNTP(10mM)0.5 μlddH2OUp to 20 μl(注意:推荐引物反应终浓度为每条引物0.1 μM,可在0.05 - 0.4 μM之间调整。MgCl2终浓度可在1.0 - 4.0 mM之间调整。)2. PCR程序过程温度时间预变性95℃5 min25 ~ 35 cycles变性95℃30 sec退火55 ~ 65℃30 sec延伸72℃60 sec/kb最后延伸72℃5 min(注意:a. 多数情况下,使用默认退火温度即可。如扩增效果不佳,可通过设置退火温度梯度实验来摸索最适退火温度。b. 预变性时间为5 min,用于充分释放酶活。请勿降低温度或缩短时间。c. 对于低拷贝模板、长片段或者扩增片段较多的情况,可延长退火时间至3 min以提高扩增效率。d. 延伸时间以最长片段为准设定。适度延长延伸时间有助于提高扩增产量且有利于困难模板扩增。延伸时间过长可能会导致非特异性扩增增多。e. 扩增微量样本时,可通过增加循环数提高扩增产物量。循环数过多可能会导致非特异性扩增增多。)