1、RNA 最重要的指标就是没有降解完整性高，目前普通的分光光度计包括 Nanodrop 等是无法 通过测量 OD260/280 和 OD260/230 来确认 RNA 是否降解的。判断 RNA 是否降解可以通过 跑 1%琼脂糖电泳检测，通过直接观察 28S:18S 比值来判断是否降解，或者用采用安捷伦 Bioanalyzer2100 仪器检测，测定 RNA 产物的 RIN 值。 2、 加入 Buffer RLS 匀浆后，加氯仿前，样品可在 –60℃-70℃ 保存一个月以上。 3、 本试剂盒抑制 RNA 酶效果极佳，所有离心步骤如未加说明，均可在常温进行。
1、所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到 13,000 rpm 的传统台式离心机，2、样品处理量绝对不要超过基因组吸附柱 DA 和和 RNA 吸附柱 RA 处理能力，否则造成 DNA 残留或产量降低。开始摸索实验条件时，如果不清楚样品 DNA/RNA 含量时宁可使用较少的 样品处理量，将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。 3、Buffer RLT Plus 和 Buffer RW1 中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤， 眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。 4、关于 DNA 的微量残留: 一般说来任何总 RNA 提取试剂在提取过程中无法完全避免 DNA 的微量残留（DNase 消化也无 法做到 100%无残留），本试剂盒可以做到绝大多数 DNA 已经被清除，不需要 DNase 消化，可直 接用于反转录 PCR 和荧光定量 PCR。个别特殊情况如 DNA 含量过于丰富造成残留或者要进行 严格的 mRNA 表达量分析荧光定量 PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时： 1) 选用跨内含子的引物,以穿过 mRNA 中的连接区,这样 DNA 就不能作为模板参与扩增反应。 2) 选择基因组 DNA 和 cDNA 上扩增的产物大小不一样的引物对。 3) 将 RNA 提取物用 RNase-free 的 DNase I 处理。本试剂盒还可以用于 DNase I 处理后的 RNA 清洁(cleanup)。 4) 在步骤 Buffer RW1 漂洗前，直接在吸附柱 RA 上进行 DNase I 处理。 5) ...
1、RNA 最重要的指标就是没有降解完整性高，目前普通的分光光度计包括 Nanodrop 等是无法 通过测量 OD260/280 和 OD260/230 来确认 RNA 是否降解的。判断 RNA 是否降解可以通过 跑 1%琼脂糖电泳检测，通过直接观察 28S:18S 比值来判断是否降解，或者用采用安捷伦 Bioanalyzer2100 仪器检测，测定 RNA 产物的 RIN 值。 2、单植物组织(如水稻、 玉米、拟南芥、烟草、小麦等)都有良好效果。但是对于多糖多酚植物如棉花，某些难破壁 的细菌等样品不适用。
1、所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到 13,000 rpm 的传统台式离心机。 2、 结合液中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若 沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或者生理盐水冲洗。 3、 电泳时最好使用新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果。 4、 切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对 RNA 造成损伤。也可以选择可见光染料染色 后在可见光下切胶会避免紫外对 RNA 损伤。 5、 回收率与片段大小、凝胶浓度、初始 RNA 量和洗脱体积有关。