(注意:以下举例为推荐PCR体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的调整和优化)1. PCR体系推荐反应体系(20 μl)试剂用量模板DNAPrimer mix (10 μM each)0.5 μl10 × Multiplex Buffer2 μlMultiplex DNA Polymerase1 μldNTP(10mM)0.5 μlddH2OUp to 20 μl(注意:推荐引物反应终浓度为每条引物0.1 μM,可在0.05 - 0.4 μM之间调整。)2. PCR程序过程温度时间预变性95℃5 min25 ~ 35 cycles变性95℃30 sec退火55 ~ 65℃30 sec延伸72℃60 sec/kb最后延伸72℃5 min(注意:a. 多数情况下,使用默认退火温度即可。如扩增效果不佳,可通过设置退火温度梯度实验来摸索最适退火温度。b. 预变性时间为5 min,用于充分释放酶活。请勿降低温度或缩短时间。c. 对于低拷贝模板、长片段或者扩增片段较多的情况,可延长退火时间至3 min以提高扩增效率。d. 延伸时间以最长片段为准设定。适度延长延伸时间有助于提高扩增产量且有利于困难模板扩增。延伸时间过长可能会导致非特异性扩增增多。e. 扩增微量样本时,可通过增加循环数提高扩增产物量。循环数过多可能会导致非特异性扩增增多。)
1. Agarose 的纯度对 DNA 条带的清晰度影响很大,电泳时请使用高质量的 Agarose。 2. 琼脂糖凝胶浓度与与 DNA 片段的分离性能有密切关系,电泳时请使用合适浓 度的凝胶。 3. 及时更换电泳缓冲液并使用新制备的琼脂糖凝胶,以免影响电泳结果。 4. 进行电泳时,彻底的溶解混匀,避免反复冻融和污染。
该产品用于流式细胞分析和细胞培养。 该产品已经通过流式细胞分析测试了在正常人外周血和小鼠脾脏细胞上的应用。
1.贮藏温度≤-15℃,可保存 5 年; 4℃存放时,请勿超过一个月 2.血清溶解以后,出现少量絮状物为正常现象,不影响产品品质;欲去除这些絮状沉淀物, 可以将血清分装至无菌离心管内,以 400~600g 离心 5min,上清液即可加入培养基内 一起培养。 血清的解冻: (1)请在 2℃~8℃环境中解冻,不宜在较高温度下进行解冻,解冻温度较高会导致血清浑浊,沉淀增加,品质下降; (2)血清解冻的过程中请不时摇匀(小心勿造成气泡),使血清成分和温度均匀,从 而减少沉淀的产生; (3)血清解冻后应尽快用完,尽量避免反复冻融; (4)血清不宜在室温中长时间放置,使用后尽快放回 2℃~8℃中,2℃~8℃存放时, 请勿超过一个月。 (5)高温解冻、剧烈摇晃、反复冻融、放置时间过长等,均会导致血清品质的降低。 3. 血清使用比例:解冻后的血清按营养液配制比例要求添加, 通常培养细胞按 8%~ 12%比例、冻存细胞按 15%~25%比例添加,培养和冻存有特定要求的细胞按特定要求 比例添加即可。
(注意:以下举例为常规qPCR 反应体系和反应程序,实际操作中应根据模板、引物结构和目的 片段大小不同进行相应的改进和优化)1. 根据以下表格配置反应体系,总体积为20 μl试剂用量终浓度2 × Probe qPCR Master Mix10 μl1 ×正义引物 (10 μM)0.5 μl0.25 μM反义引物 (10 μM)0.5 μl0.25 μM探针(10 μM)0.5 μl0.25 μM50× ROX Reference Dye I or II0.4 μl1 ×模板DNAx μlDEPC-ddH2OUp to 20 μl注意:1)通常引物浓度以 0.25 μM 可以得到较好结果,可以在 0.1 ~ 1.0 μM 作为设定范围的参考。 2)使用的探针浓度,与使用的荧光定量 PCR 仪、探针种类、荧光标记物质种类有关,实际使用时 请参照仪器说明书,或各荧光探针的具体使用要求进行浓度的调节。 3)通常 DNA 模板的量以 10-100 ng 基因组 DNA 或 1-10 ng cDNA 为参照,因不同物种的模板中含 有的目的基因拷贝数不同,可对模板进行梯度稀释,以确定最佳的模板使用量。需使用 ROX Reference Dye I 的机型:ABI Prism5700、7000、7300、7700、7900、7900HT、 7900HT Fast、Step-One、Step-One Plus。 需使用 ROX Reference Dye II 的机型:ABI Prism 7500/7500Fast、ViiA7, Stratagene MX4000/MX3005P/MX3000P。 不需要使用 ROX 的机型:Bio-Rad CFX96, CFX384, ...
1. 本试剂仅用于体外诊断,不作其他用途。 2. 开始实验前,应仔细阅读此说明书。 3. 本试剂仅限有专业经验或经专业培训的人员使用。 4. 避免试剂接触眼睛和粘膜,如接触到敏感区域,立即用大量清水冲洗。