1、RNA 最重要的指标就是没有降解完整性高,目前普通的分光光度计包括 Nanodrop 等是无法 通过测量 OD260/280 和 OD260/230 来确认 RNA 是否降解的。判断 RNA 是否降解可以通过 跑 1%琼脂糖电泳检测,通过直接观察 28S:18S 比值来判断是否降解,或者用采用安捷伦 Bioanalyzer2100 仪器检测,测定 RNA 产物的 RIN 值。 2、单植物组织(如水稻、 玉米、拟南芥、烟草、小麦等)都有良好效果。但是对于多糖多酚植物如棉花,某些难破壁 的细菌等样品不适用。
1、所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到 13,000 rpm 的传统台式离心机。 2、 结合液中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若 沾染皮肤、眼睛时,要立即用大量清水或者生理盐水冲洗。 3、 电泳时最好使用新的电泳缓冲液,以免影响电泳和回收效果。 4、 切胶时,紫外照射时间应尽量短,以免对 RNA 造成损伤。也可以选择可见光染料染色 后在可见光下切胶会避免紫外对 RNA 损伤。 5、 回收率与片段大小、凝胶浓度、初始 RNA 量和洗脱体积有关。