(注意:以下举例为推荐PCR体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的调整和优化)1. PCR体系推荐反应体系(20 μl)1. 试剂用量模板DNAPrimer mix (10 μM each)0.5 μl5 × Multiplex Buffer(无MgCl2)4 μlMultiplex DNA Polymerase1 μlMgCl2(25mM)1 μldNTP(10mM)0.5 μlddH2OUp to 20 μl(注意:推荐引物反应终浓度为每条引物0.1 μM,可在0.05 - 0.4 μM之间调整。MgCl2终浓度可在1.0 - 4.0 mM之间调整。)2. PCR程序过程温度时间预变性95℃5 min25 ~ 35 cycles变性95℃30 sec退火55 ~ 65℃30 sec延伸72℃60 sec/kb最后延伸72℃5 min(注意:a. 多数情况下,使用默认退火温度即可。如扩增效果不佳,可通过设置退火温度梯度实验来摸索最适退火温度。b. 预变性时间为5 min,用于充分释放酶活。请勿降低温度或缩短时间。c. 对于低拷贝模板、长片段或者扩增片段较多的情况,可延长退火时间至3 min以提高扩增效率。d. 延伸时间以最长片段为准设定。适度延长延伸时间有助于提高扩增产量且有利于困难模板扩增。延伸时间过长可能会导致非特异性扩增增多。e. 扩增微量样本时,可通过增加循环数提高扩增产物量。循环数过多可能会导致非特异性扩增增多。)
本产品供科学研究和生产使用,用于组织和细胞的体外培养。禁止临床使用。
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