（注意：试剂盒不具备独立的体外诊断作用，不可作为诊断试剂。 应严格控制病理组织的取样量， 建议用量为 5-10mg（一颗到半颗大米大小），取样量太多容易造成假阴性结果。）一、RNA 释放 1．组织类样本： 1.1 取少量样品（5-10 mg，一颗到半颗大米大小）于 1.5 ml 的离心管中，加入 100 μl 裂解液 B1，确保缓冲液可以完全覆盖样品。 1.2 用组织研磨器充分研磨。研磨结束后，加入 100 μl 裂解液 B2，震荡混匀，12,000 rpm 离心 2 min。 1.3 离心结束后，小心吸取 100 μl 上清液于另一干净的 1.5 ml 离心管中作为模板备用。 （注意：必须现处理现用。） 2． 血液类样本： 取 40 μl 血液加入到 100 μl 裂解液 B1 中，混匀后加入 100 μl 裂解液 B2，再涡旋混 匀，此混合液即可作为模板进行后续 qRT-PCR 检测。 注意：必须现处理现用。二、qRT-PCR 扩增 1. qRT-PCR 扩增反应 推荐反应体系（20 μl）试剂用量2ⅹOne-Step qRT-PCR Mix 10 μlRTase/Taq Mix1 μl直扩 qRT-PCR探针(10mM)0.5 μl直扩 qRT-PCR Primer F (10 μM)0.5 μl直扩 qRT-PCR Primer R (10 μM)0.5 μl模板2 μlddH2OUp to 20 μl试剂全部加好后，混匀后瞬时离心，将所有试剂收集到管底。 一般引物终浓度为 2 pmol/μl，探针终浓度为 4 pmol/μl。2. qRT-PCR反应条件：按下表进行qRT-PCR程序设置：过程温度时间反转录50℃1...
1. 本产品是 30×浓缩型保存液，1mL 游离 DNA 保存液可保存 30mL 新鲜血液。根据所处理的血液量加入所需要游离 DNA 保存液的体积。2. 将收集管存放于温度适当的地方，保存温度不要低于 4℃。3. 后续处理按常规的游离 DNA 提取即可。
1. 将约 1mL 游离 DNA 保存液加入到 10 mL 含游离 DNA 的血液样本中。2. 将收集管存放于 4℃-25℃条件下保存。3. 后续处理按常规的游离 DNA 提取操作即可。
1. 没有RNA产物。 最常见原因是模板有RNase污染，可用纯化好的RNA跟模板DNA一起保温再电泳， 再检测其是否有污染。 2. RNA产量低。 最常见的原因是DNA模板。在转录序列的第一个和第二个碱基最好都是G，在前14 个碱基内避免有U存在。 3. RNA长度比预期的短。 可能是模板序列中有T7 RNA聚合酶的终止序列。 4. RNA长度比预计的长。 T7 RNA聚合酶跟Taq DNA聚合酶一样，有不依赖于模板的加尾功能，最多有一半 的RNA可以带一个或两个碱基的尾巴。如果RNA长度比预计的长很多，使用的模板 又是 质粒DNA，则可能是质粒线性化不彻底。5. 5′单磷酸还是三磷酸? 如果使用GTP，则得到的RNA是三磷酸，体外转录时如果保温时间太长（如12小 时），则有50%的三磷酸会变成单磷酸。如果在转录体系中加入GMP，则T7 RNA聚 合 酶将优先使用GMP，所得RNA产物中5'端是单磷酸的比例将大大增加。 6. 用体外转录试剂盒如何得到带帽RNA? 需加入带帽NTP类似物即可。
本产品供科学研究和生产使用，用于组织和细胞的体外培养。禁止临床使用。
注意：尽管本产品含有病毒灭活剂，但不能排除离心管外在取样时污染了病毒，因 此操作人员必须按处理传染性样品的方法进行相应的防护，必须在合乎国家规定的实验 室进行所有操作。本产品具有抑菌性，但不能排除分装到采样管中时不被污染，分装前 后建议进行适当的灭菌处理。1. 将痰液病毒保存液分装到采样管中。 2. 采样前，在含有痰液病毒保存液的采样管的标签上标注相关样品信息。 3. 迅速将粘性生物样本放入含有痰液病毒保存液的采样管中，旋紧管盖，震荡采样 管直至液体变清亮。 4. 新鲜采集的标本应在 4℃-25℃下 96 小时（4 天）内运送至实验室，未能 96 小时 送至实验室的，应置于-70℃或以下保存，DNA 样品也可以放-20℃保存。