1. 融化后的感受态细胞应及时进行转化,以免降低转化效率;融化后不宜再次冻结保 存。 2. 整个操作过程要轻柔,避免移液枪吹吸。 3. 请使用传热性能好的薄壁试管或离心管,换用不同的试管或离心管时,应摸索热激时 间,以获得最佳转化效率。 4. 请保留剩余的连接反应液,以便在转化实验不成功时重新进行转化。 5. 经验表明,使用 SOC 培养基复苏比使用 LB 培养基复苏的转化效率高约一倍以上。
1、 感受态细胞最好在冰上融化。 2、转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。 3、 同时转化 2-3 种质粒时可增加质粒的用量。 4、 AH109 酵母菌株对高温敏感最适生长温度为 27-30C;高于 31℃生长速度和转化效率呈 指数下降。 5、 菌落变粉不是污染,是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后,平 板上的 Adenine 被酵母消耗完毕,酵母试图通过自身代谢途径合成 Adenine 以供利 用,然而,有些菌株的 ADE2 基因被破坏,Adenine 合成途径受阻;又由于其 ADE4, 5,6,7,8 基因均正常,所以造成中间产物 P-ribosylamino imidazole(AIR)在细胞中积 累而使菌落变为粉红色。 6、 酵母在缺陷培养基中生长速度比 YPDA 培养基慢,培养基中缺陷成分越多,生长越