1、 感受态细胞最好在冰上融化。 2、转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。 3、 同时转化 2-3 种质粒时可增加质粒的用量。 4、 AH109 酵母菌株对高温敏感最适生长温度为 27-30C；高于 31℃生长速度和转化效率呈 指数下降。 5、 菌落变粉不是污染，是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后，平 板上的 Adenine 被酵母消耗完毕，酵母试图通过自身代谢途径合成 Adenine 以供利 用，然而，有些菌株的 ADE2 基因被破坏，Adenine 合成途径受阻;又由于其 ADE4， 5，6，7，8 基因均正常，所以造成中间产物 P-ribosylamino imidazole(AIR)在细胞中积 累而使菌落变为粉红色。 6、 酵母在缺陷培养基中生长速度比 YPDA 培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越
1、荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。 2 、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 3、 对于检测试剂和 RNA 标准品，每次使用前要先摇匀再离心数秒钟，使液体充分 沉降到管底。 4、 为保证定量结果的精确，请使用校准后的移液器操作。
1、 冻存样品避免反复冻融，否则会导致样品中 DNA 的质量下降。 2、 若裂解液(Buffer GL)、洗涤液(Buffer W1)有沉淀，可放于 37°C 水浴中重新溶解，摇匀 后使用。3、 试剂套装各组分使用前提前取出并平衡到室温（15°C~25°C）。 4、 使用前确保洗涤液(Buffer W1 和 W2)已按照试剂瓶标签的提示量添加无水乙醇并标 记。异丙醇和无水乙醇需客户自备。 5、实验前请仔细阅读说明书。
1、 RNA 最重要的指标就是没有降解完整性高，目前普通的分光光度计包括 Nanodrop 等是无法 通过测量 OD260/280 和 OD260/230 来确认 RNA 是否降解的。判断 RNA 是否降解可以通过 跑 1%琼脂糖电泳检测，通过直接观察 28S:18S 比值来判断是否降解，或者用采用安捷伦 Bioanalyzer2100 仪器检测，测定 RNA 产物的 RIN 值。 2、 Trizol 的适用范围很广。绝大部分常规动物组织细胞(如：肝脏、肾脏、脑组织、培养细胞)、 简单植物组织(如水稻、玉米、拟南芥、烟草、小麦等)都有良好效果。但是对于多糖多酚植 物如棉花，某些难破壁的细菌等样品不适用。 3、 在匀化后和加入氯仿之前，样品可以在–60~–70°C 保存至少一个月。RNA 沉淀（步骤 6， RNA 漂洗）溶于 75%的乙醇在 2~8°C 至少可以保存一周，在–5~–20°C 下至可保存一年。
1、 所有的离心步骤均可在室温完成（4℃离心也可以），使用转速可以达到 13,000 rpm 的传 统台式离心机，如 Eppendorf 5415C 或者类似离心机。 2、 需要自备β-巯基乙醇，乙醇，研钵(可选)。 3、 样品处理量绝对不要超过基因组清除柱 DA 和和 RNA 吸附柱 RA 处理能力，否则造成 DNA 残留或产量降低。开始摸索实验条件时，如果不清楚样品 DNA/RNA 含量时可使 用较少的样品处理量，将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。 4、 Buffer CLB 和 Buffer RLT Plus 和 Buffer RW1 中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套， 避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。 5、 关于 DNA 的微量残留: 一般说来任何总 RNA 提取试剂在提取过程中无法完全避免 DNA 的微量残留（DNase 消化 也无法做到 100%无残留），本公司的 RNA 提取产品可清除绝大多数 DNA，不需要 DNase 消化，可直接用于反转录 PCR 和荧光定量 PCR。个别特殊情况如 DNA 含量过于丰富造成残 留或者要进行严格的 mRNA 表达量分析荧光定量 PCR，我们建议在进行模板和引物的选择 时： 1) 选用跨内含子的引物，以穿过 mRNA 中的连接区，这样 DNA 就不能作为模板参与扩增 反应。 2) 选择基因组 DNA 和 cDNA 上扩增的产物大小不一样的引物对。 3) 将 RNA 提取物用 RNase-free 的 DNase I 处理。本试剂盒还可以用于 DNase I 处理后 RNA 清洁(cleanup)。 ...
1. 取 200μl 血清等体液（需恢复到室温，不足可用 0.9% NaCl 或者 PBS 补足）转入上 述 1.5ml 离心管，加入 400μl Buffer RLB, 立刻涡旋振荡充分混匀。 2. 室温(15-25℃)放置 10 分钟，每隔 5 分钟，振荡混匀一次。 3. 加入 450μl 无水乙醇，立刻涡旋振荡充分混匀。 如果周围环境高于 25℃, 乙醇需要冰上预冷后再加入。 4. 将上述混合物加入一个吸附柱 RA 中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm 离心 30-60 秒，倒掉收集管中的废液。 如果总体积超过 750μl，可分两次将溶液加入同一个吸附柱 RA 中。 5. 加 500μl Buffer RE，12,000rpm 离心 30 秒，弃废液。 6. 加入 500μl Buffer RW（请先检查是否已加入无水乙醇!!!），12,000rpm 离心 30 秒， 弃废液，加入 500μl Buffer RW，重复一遍。 7. 将吸附柱 RA 放回空收集管中，13,000rpm 离心 2 分钟，尽量除去 Buffer RW， 以免 Buffer RW 中残留乙醇抑制下游反应。 8. 取出吸附柱 RA，放入一个 RNase free 的离心管中，在吸附膜的中间部位加 30-50μl RNase free H2O（事先在 65－70℃水浴中加热效果更好）， 室温放置 1 分钟， 12,000rpm 离心 1 分钟。如果想得到较多量的 RNA，可将得到的溶液重新加入离 心吸附柱中，12,000rpm 离心 1 分钟。 洗脱体积越大，洗脱效率越高。如果需要 RNA 浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小 体积不应少于 20μl，体积过小降低洗脱效率，减少 RNA...