应用领域:适用于基因组学、蛋白质组学、细胞组学、 免疫检测、代谢组学、生物制药研究与开发以及其他常用的高通量移液过程。
一、哺乳动物血液(包括人血液) 1. 将抗凝血(1-10 mL)加入到适当容量的塑料离心管中。2. 加入等体积的非冻型血液保存液,充分振荡混合均匀。3. 常温闭光保存直到使用。4. 提取 DNA 时,可以取出部分液体,用自备的蛋白酶 K (终浓度为 0.1 mg/mL),37 ℃处理过夜,然后再用经典的醇/氯仿抽提+乙醇沉淀方法得到 DNA。 二、禽类血液 由于禽类血液有核细胞量远高于哺乳动物,血液的使用量很少,一般只有哺乳动物血液用量的 1/100 到 1/ 1000,所以需先用等体积的水将非冻型血液保存液稀释,然后直接将禽类血液加入。其余操作同上。
1. 本试剂仅用于体外诊断,不作其他用途。 2. 开始实验前,应仔细阅读此说明书。 3. 本试剂仅限有专业经验或经专业培训的人员使用。 4. 避免试剂接触眼睛和粘膜,如接触到敏感区域,立即用大量清水冲洗。
1、 在操作过程中应避免 RNase 污染,防止 RNA 降解或实验中的交叉污染,建议在专门的 区域进行 RNA 操作,使用专门的仪器和耗材,操作人员带口罩和一次性手套并经常更 换手套。 2、 实验尽量使用一次性塑料器皿,若使用玻璃器皿,应使用 0.1%DEPC(焦碳酸二乙 酯)水溶液在 37℃处理 12 小时,并在 120℃下高压灭菌 30 分钟后使用,或者将玻璃 器皿在 180℃下干热灭菌 60 分钟后使用。实验中用到的无菌水应使用 0.1%的 DEPC 处 理后进行高压灭菌。 3、 本试剂使用前请上下颠倒轻轻混匀,尽量避免起泡,并经短暂离心后使用。使用后应 尽快放回-20℃,避免反复冻融。 4、 本试剂盒必须使用特异性引物,引物的选择可根据具体实验来选择,引物设计的好坏 直接影响到 RT-PCR 反应的结果,设计引物时需考虑 GC 含量,引物长度,引物位 置,PCR 产物的二级结构等因素,建议采用专业的引物设计软件来设计。
1、 如 Buffer GTL 和 Buffer GL 产生沉淀,可在 56℃水浴溶解; 2、 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的 DNA 片段小,提取量下降; 3、 所有离心步骤均为台式离心机,室温下操作; 4、 按要求在 Buffer W1/W2 中加入无水乙醇。
1. 估计 PCR 反应液或酶切反应液的体积,向其中加入等体积溶液 Buffer GN,充分混匀 (无需去除石蜡油或矿物油)。加入等体积的异丙醇混匀,再加入 10μl 磁珠混匀 5min。 (注意:对于回收小于 150bp 的小片段可将溶液 Buffer GN 的体积增加到 3 倍以提高回收率;溶液混 匀后应呈现黄色。如果溶液的颜色为桔红色或紫色,请使用 10 μl 3M 乙酸钠(pH 5.0)将溶液的颜色 调为黄色后再进行后续操作。) 2. 将离心管置于磁力架上静置 1 min,磁珠完全吸附后,吸去液体。 3. 将离心管从磁力架上取下,加 600 μl Buffer W2,旋涡充分混匀 30 s。 (注意:Buffer W2 在使用前按要求加入无水乙醇,用后应立即盖紧瓶盖,以防乙醇挥发)4. 将离心管置于磁力架上静置 1 min,磁珠完全吸附后,吸去液体。 5. 将离心管置于磁力架上,开盖室温放置 5-10min。 (注意:乙醇残留会抑制后续的酶反应,所以晾干时要确保乙醇挥发干净。但也不要干燥过度,以免 DNA 难以洗脱)6. 将离心管从磁力架上取下,加入 30 - 50 μl Buffer EB,充分震荡 1-2 min。7. 将离心管置于磁力架上静置 1 min,磁珠完全吸附后,小心将溶液转移至新的离心管 中,并于适当条件保存。 (注意:为增加洗脱效率,可将洗脱液在 60℃预热。如需使用去离子水洗脱,可用 NaOH 调整其 pH 值在 7.0 - 8.5 之间)