（注意：试剂盒不具备独立的体外诊断作用，不可作为诊断试剂。 应严格控制病理组织的取样量， 建议用量为 5-10mg（一颗到半颗大米大小），取样量太多容易造成假阴性结果。）
一、RNA 释放
1．组织类样本：
1.1 取少量样品（5-10 mg，一颗到半颗大米大小）于 1.5 ml 的离心管中，加入 100 μl 裂解液 B1，确保缓冲液可以完全覆盖样品。
1.2 用组织研磨器充分研磨。研磨结束后，加入 100 μl 裂解液 B2，震荡混匀，12,000 rpm 离心 2 min。
1.3 离心结束后，小心吸取 100 μl 上清液于另一干净的 1.5 ml 离心管中作为模板备用。
（注意：必须现处理现用。）
2． 血液类样本：
取 40 μl 血液加入到 100 μl 裂解液 B1 中，混匀后加入 100 μl 裂解液 B2，再涡旋混 匀，此混合液即可作为模板进行后续 qRT-PCR 检测。 注意：必须现处理现用。
二、qRT-PCR 扩增
1. qRT-PCR 扩增反应 推荐反应体系（20 μl）
试剂 | 用量 |
2ⅹOne-Step qRT-PCR Mix | 10 μl |
RTase/Taq Mix | 1 μl |
直扩 qRT-PCR探针(10mM) | 0.5 μl |
直扩 qRT-PCR Primer F (10 μM) | 0.5 μl |
直扩 qRT-PCR Primer R (10 μM) | 0.5 μl |
模板 | 2 μl |
ddH2O | Up to 20 μl |
试剂全部加好后，混匀后瞬时离心，将所有试剂收集到管底。
一般引物终浓度为 2 pmol/μl，探针终浓度为 4 pmol/μl。
2. qRT-PCR反应条件：
按下表进行qRT-PCR程序设置：
预变性 | 95℃ | 3 min |
40 cycles | 变性 | 95℃ | 10 sec |
退火和延伸 | 60℃（此步收集荧光） | 30 sec |
根据引物（探针）设计确定退火温度。
三、结果监测
对于qRT-PCR，反应结束后确认qRT-PCR的扩增曲线，并进行相应分析。
（注意：举例仅供参考，实际反应条件因模板、引物等的结构不同而各异，需根据实际情况设定最佳反应条件。在操作中如发现管壁或管盖上有液体可以瞬时离心将其甩至管底。）