注意：
a：扩增> 5 kb 的产物时，建议使用 95℃ 5 min 预变性处理。
b-1：退火温度：最适 Tm 与引物间的平均温度相近，若引物间 Tm 值偏差较大，最适 Tm 用引物的 最低 Tm+1-2℃）,
b-2：退火时间：对于含兼并引物、复杂模板的扩增，建议退火时间延长至 30 s。
c：适合的延伸温度：68-75℃；推荐的延伸速度：10-15 s/kb；质粒等简单模板：5-10 s/kb；常规基 因组模板：10-15 s/kb；复杂模板、脏模板：15-25 s/kb；略微 增加延伸时间（5-10 s/kb）有利于提高 低浓度、复杂模板 PCR 的产量，但总延伸时间不超过 30 s/kb）