检测原理是碱性条件下蛋白将Cu2+还原为Cu1+（双缩脲反应），一个Cu1+与二个BCA分子螯合后产生紫色水溶性反应产物，在562 nm波长具有强烈的吸收，与20-2000 µg/mL范围的蛋白浓度呈近线性关系，检测下限达到25μg/mL，最小检测蛋白量达到0.5 μg，待测样品体积为1-20 μL，可实现蛋白浓度测定的高灵敏度和高特异性。BCA法具有高兼容性，即抗干扰能力，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的 Tween 20、60、80。本品易受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响，需确保EDTA低于10mM，无EGTA，二硫苏糖醇(DTT)低于1 mM，β-巯基乙醇低于0.01%。不适用BCA法时建议使用Bradford蛋白定量法。