1、 所有的离心步骤均可在室温完成(4℃离心也可以),使用转速可以达到 13,000 rpm 的传 统台式离心机,如 Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2、 需要自备β-巯基乙醇,乙醇,研钵(可选)。
3、 样品处理量绝对不要超过基因组清除柱 DA 和和 RNA 吸附柱 RA 处理能力,否则造成 DNA 残留或产量降低。开始摸索实验条件时,如果不清楚样品 DNA/RNA 含量时可使 用较少的样品处理量,将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。
4、 Buffer CLB 和 Buffer RLT Plus 和 Buffer RW1 中含有刺激性化合物,操作时戴乳胶手套, 避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
5、 关于 DNA 的微量残留: 一般说来任何总 RNA 提取试剂在提取过程中无法完全避免 DNA 的微量残留(DNase 消化 也无法做到 100%无残留),本公司的 RNA 提取产品可清除绝大多数 DNA,不需要 DNase 消化,可直接用于反转录 PCR 和荧光定量 PCR。个别特殊情况如 DNA 含量过于丰富造成残 留或者要进行严格的 mRNA 表达量分析荧光定量 PCR,我们建议在进行模板和引物的选择 时:
1) 选用跨内含子的引物,以穿过 mRNA 中的连接区,这样 DNA 就不能作为模板参与扩增 反应。
2) 选择基因组 DNA 和 cDNA 上扩增的产物大小不一样的引物对。
3) 将 RNA 提取物用 RNase-free 的 DNase I 处理。本试剂盒还可以用于 DNase I 处理后 RNA 清洁(cleanup)。
4) 在步骤 Buffer RW1 漂洗前,直接在吸附柱 RA 上进行 DNase I 柱上消化处理。