1. 取 200μl 血清等体液（需恢复到室温，不足可用 0.9% NaCl 或者 PBS 补足）转入上 述 1.5ml 离心管，加入 400μl Buffer RLB, 立刻涡旋振荡充分混匀。 

2. 室温(15-25℃)放置 10 分钟，每隔 5 分钟，振荡混匀一次。 

3. 加入 450μl 无水乙醇，立刻涡旋振荡充分混匀。 

如果周围环境高于 25℃, 乙醇需要冰上预冷后再加入。 

4. 将上述混合物加入一个吸附柱 RA 中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm 离心 30-60 秒，倒掉收集管中的废液。 

如果总体积超过 750μl，可分两次将溶液加入同一个吸附柱 RA 中。 

5. 加 500μl Buffer RE，12,000rpm 离心 30 秒，弃废液。 

6. 加入 500μl Buffer RW（请先检查是否已加入无水乙醇!!!），12,000rpm 离心 30 秒， 弃废液，加入 500μl Buffer RW，重复一遍。 

7. 将吸附柱 RA 放回空收集管中，13,000rpm 离心 2 分钟，尽量除去 Buffer RW， 以免 Buffer RW 中残留乙醇抑制下游反应。 

8. 取出吸附柱 RA，放入一个 RNase free 的离心管中，在吸附膜的中间部位加 30-50μl RNase free H2O（事先在 65－70℃水浴中加热效果更好）， 室温放置 1 分钟， 12,000rpm 离心 1 分钟。如果想得到较多量的 RNA，可将得到的溶液重新加入离 心吸附柱中，12,000rpm 离心 1 分钟。 

洗脱体积越大，洗脱效率越高。如果需要 RNA 浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小 体积不应少于 20μl，体积过小降低洗脱效率，减少 RNA 产量。 

9. 提纯的 RNA 建议最好立刻使用，否则立刻短期放置在-70℃备用。