1、所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到 13,000 rpm 的传统台式离心机，

2、样品处理量绝对不要超过基因组吸附柱 DA 和和 RNA 吸附柱 RA 处理能力，否则造成 DNA 残留或产量降低。开始摸索实验条件时，如果不清楚样品 DNA/RNA 含量时宁可使用较少的 样品处理量，将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。 

3、Buffer RLT Plus 和 Buffer RW1 中含有刺激性化合物，

操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤， 眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。 

4、关于 DNA 的微量残留: 

   一般说来任何总 RNA 提取试剂在提取过程中无法完全避免 DNA 的微量残留（DNase 消化也无 法做到 100%无残留），本试剂盒可以做到绝大多数 DNA 已经被清除，不需要 DNase 消化，可直 接用于反转录 PCR 和荧光定量 PCR。个别特殊情况如 DNA 含量过于丰富造成残留或者要进行 严格的 mRNA 表达量分析荧光定量 PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时： 

   1) 选用跨内含子的引物,以穿过 mRNA 中的连接区,这样 DNA 就不能作为模板参与扩增反应。 

   2) 选择基因组 DNA 和 cDNA 上扩增的产物大小不一样的引物对。 

   3) 将 RNA 提取物用 RNase-free 的 DNase I 处理。本试剂盒还可以用于 DNase I 处理后的 RNA 清洁(cleanup)。 

   4) 在步骤 Buffer RW1 漂洗前，直接在吸附柱 RA 上进行 DNase I 处理。 

   5) RNA 纯度及浓度检测: 

        完整性：RNA 可用普通琼脂糖凝胶电泳(电泳条件：胶浓度 1.2%；0.5×TBE 电泳缓冲液；150v， 15 分钟)检测完整性。由于细菌中 70%-80%的 RNA 为 rRNA，电泳后 UV 下应能看到非常明显的 rRNA 条带。细菌 rRNA 大小分别约为 5 kb 和 2kb，分别相当于 26S 和 13S rRNA。细菌 RNA 样 品中最大 rRNA 亮度应为次大 rRNA 亮度的 1.5-2.0 倍，否则表示 RNA 样品的降解。出现弥散片状或条带消失表明样品严重降解。 纯度：OD260/OD280 比值是衡量蛋白质污染程度的参考指标。高质量的 RNA，OD260/OD280 读 数在 2.1-2.2 之间（100%纯的 RNA 比值一般是 2.2 左右，很多公司无法达到这个标准，所以 1.9-2.0 就凑合用了，但是我们的产品标准一般可以达到 2.1-2.2）。OD260/OD280 读数受测定所用溶液的 pH 值影响。同一个 RNA 样品，假定在 10mM Tris，pH7.5 溶液中测出的 OD260/OD280 读数 1.8-2.1 之间，在水溶液中所测读数则可能在 1.5-1.9 之间，但这并不表示 RNA 不纯。 浓度：取一定量的 RNA 提取物，用 RNase-free 水稀释 n 倍，用 RNase-free 水将分光光度计调零， 取稀释液进行 OD260,OD280 测定，按照以下公式进行 RNA 浓度的计算：终浓度（ng/μl） =(OD260)×(稀释倍数 n)×40