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1. 如 Buffer GTL 和 Buffer GL 产生沉淀,可在 56℃水浴溶解; 2. 样品应避免反复冻融,否则会导致提取的 DNA 片段小,提取量下降; 3. 所有离心步骤均为台式离心机,室温下操作; 4. 按要求在 Buffer W1 和 Buffer W2 中加入无水乙醇。
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1. 如果每次的使用量很小,建议适当分装后再使用。 2. 手上通常有 RNase,必须戴一次性手套操作,以防 RNase 污染。 3. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药 品,不得存放于普通住宅内。 4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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1. 注意无菌操作,尽量避免污染。 2. 加入 2×HeBS 500ul 到上述含有 DNA 的 500ul 溶液后,应在 1~2min 内加入到细胞中, 时间间隔不宜过久,以免影响转染效果。 3. 转染 12~24h 后,可以加入终浓度为 10mmol/L 的丁酸钠溶液,提高病毒滴度。 4. 收集病毒上清时,可以每 12h 收集一次,但同时应补足培养液,避免病毒滴度明显下 降。 5. 4℃ 500g 离心 5min 收集上清目的在于去除活细胞。 6. 该试剂用于转染时,其转染效率一般在 30~60%之间. 7. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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从冰箱中取出本产品后在常温下放置,每隔 20 分钟轻微晃动以促进均匀解冻,至充 分解冻后可立即使用。解冻后的产品在 4℃保存不可超过一个月。
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(注意:以下举例为推荐PCR体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的调整和优化)1. PCR体系推荐反应体系(20 μl)试剂用量模板DNAPrimer mix (10 μM each)0.5 μl10 × Multiplex Buffer2 μlMultiplex DNA Polymerase1 μldNTP(10mM)0.5 μlddH2OUp to 20 μl(注意:推荐引物反应终浓度为每条引物0.1 μM,可在0.05 - 0.4 μM之间调整。)2. PCR程序过程温度时间预变性95℃5 min25 ~ 35 cycles变性95℃30 sec退火55 ~ 65℃30 sec延伸72℃60 sec/kb最后延伸72℃5 min(注意:a. 多数情况下,使用默认退火温度即可。如扩增效果不佳,可通过设置退火温度梯度实验来摸索最适退火温度。b. 预变性时间为5 min,用于充分释放酶活。请勿降低温度或缩短时间。c. 对于低拷贝模板、长片段或者扩增片段较多的情况,可延长退火时间至3 min以提高扩增效率。d. 延伸时间以最长片段为准设定。适度延长延伸时间有助于提高扩增产量且有利于困难模板扩增。延伸时间过长可能会导致非特异性扩增增多。e. 扩增微量样本时,可通过增加循环数提高扩增产物量。循环数过多可能会导致非特异性扩增增多。)
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1. Agarose 的纯度对 DNA 条带的清晰度影响很大,电泳时请使用高质量的 Agarose。 2. 琼脂糖凝胶浓度与与 DNA 片段的分离性能有密切关系,电泳时请使用合适浓 度的凝胶。 3. 及时更换电泳缓冲液并使用新制备的琼脂糖凝胶,以免影响电泳结果。 4. 进行电泳时,彻底的溶解混匀,避免反复冻融和污染。